Il Cenacolo costruito all'inizio del Trecento e poi ristrutturato intorno al 1430 era il refettorio monumentale del convento delle terziarie francescane della Beata Angelina da Foligno, da cui il nome di Fuligno dato al complesso. Al suo interno, sulla parete di fondo della sala, è conservato l’affresco dell'Ultima Cena, dipinto da Pietro Perugino nell’ultimo decennio del Quattrocento. La grande opera rappresenta una tavola a ferro di cavallo alla quale sono seduti Gesù e gli apostoli, ad eccezione di Giuda che si trova dall'altra parte della tavola, raffigurato di spalle nell’atto di voltarsi verso lo spettatore. Le iscrizioni sul gradino ligneo alla base della tavola riportano i nomi degli apostoli. Alle spalle della raffigurazione dell’Ultima Cena il Perugino dipinse un vasto loggiato, inscritto nell'architettura reale del refettorio, che apre la raffigurazione sullo sfondo di un vasto paesaggio naturale in cui è ambientata la scena dell'Orazione nell'Orto del Getsemani.